EY-cadherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401988

概要

CDH18はヒトのEYカドヘリンをコードしており、Ca²⁺依存性の細胞間接着を担う古典的カドヘリンファミリーの一員である。EYカドヘリンは、カテニン複合体を介して接着結合（adherens junction）をアクチン細胞骨格へ連結することで、組織構築の維持に寄与する。細胞間の凝集性、極性、ならびに接触依存的シグナル伝達の調節を通じて、CDH18は上皮および神経系の組織化に関連する過程（移動や境界形成など）に影響し得る。疾患関連モデルでは、カドヘリンの発現変化や接着結合の完全性低下が、分化の破綻や浸潤性行動としばしば関連するため、CDH18は接着に駆動される表現型を研究するうえで有用な結節点となる。CDH18の発現パターンや遺伝学的／エピジェネティックな撹乱は、がんや神経発達障害を含む、細胞アイデンティティと細胞間連結が損なわれる文脈で検討されてきた。

EY-cadherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDH18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDH18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDH18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EY-cadherinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EY-cadherinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDH18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EY-cadherinの機能に不可欠なCDH18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDH18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EY-cadherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEY-cadherin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDH18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EY-cadherin HDRプラスミド（h）および EY-cadherin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDH18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDH18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。