EXT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420252-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EXT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EXT1 Double Nickase Plasmid (m) e il EXT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ext1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EXT1 Antibody (A-7): sc-515144
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EXT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420252-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **EXT1** codifica l’esostosina glicosiltransferasi 1 (EXT1), un componente essenziale del complesso EXT1/EXT2 che catalizza l’allungamento delle catene di eparan solfato nell’apparato di Golgi. Controllando la biosintesi dei proteoglicani a eparan solfato, EXT1 modula le interazioni ligando–recettore e la formazione di gradienti che influenzano vie come la segnalazione FGF, Wnt, Hedgehog e BMP. La struttura dei glicosaminoglicani dipendente da EXT1 influisce anche sull’organizzazione della matrice extracellulare, sull’adesione cellulare e sul traffico endocitico di morfogeni e fattori di crescita. L’alterazione della funzione di EXT1 è associata a uno sviluppo scheletrico aberrante e a un patterning tissutale modificato, rendendolo un bersaglio chiave per lo studio della segnalazione regolata dall’eparan solfato e della biologia della matrice.
EXT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ext1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ext1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ext1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ext1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.