EXT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404635-NIC

EXT1 codifica per exostosina-1, una glicosiltransferasi residente nel Golgi che forma un complesso etero-oligomerico con EXT2 per catalizzare la polimerizzazione delle catene di eparan solfato sulle proteine core dei proteoglicani. Controllando la biosintesi dell’eparan solfato, EXT1 contribuisce a organizzare la matrice extracellulare e modula la distribuzione e la segnalazione di ligandi che legano l’eparina, influenzando vie quali FGF, WNT, Hedgehog e BMP. Alterazioni della funzione di EXT1 perturbano i pattern di solfatazione dei proteoglicani e le interazioni ligando–recettore che regolano sviluppo, morfogenesi e comunicazione cellula–matrice. Alterazioni germinali e somatiche di EXT1 sono associate a crescita scheletrica anomala e a fenotipi correlati ai tumori, rendendolo un nodo utile per studiare la glicobiologia e i comportamenti cellulari dipendenti dalla segnalazione.

EXT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EXT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EXT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EXT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EXT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.