Exportin 7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405335-ACT

XPO7 codifica a exportina 7, um recetor de exportação nuclear da família carioferina-β que medeia o transporte dependente de RanGTP de cargas proteicas do núcleo para o citoplasma. A exportina 7 contribui para o tráfego nucleocitoplasmático e para a proteostase ao controlar a localização subcelular de fatores envolvidos na regulação transcricional, nas respostas ao stress e em processos associados ao ciclo celular. A desregulação das vias de transporte nuclear pode alterar programas de expressão génica e a dinâmica de sinalização, tornando o XPO7 um nó relevante para estudar mecanismos que ligam defeitos de transporte à biologia do cancro e a outras perturbações caracterizadas por uma compartimentalização nucleocitoplasmática alterada. A investigação funcional de XPO7 apoia a pesquisa sobre a seletividade da exportação nuclear, a comunicação entre vias (cross-talk) com as redes ubiquitina–proteassoma e de sinalização de stress, e dependências específicas de contexto em células em proliferação.

Exportin 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XPO7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Exportin 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XPO7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XPO7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Exportin 7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XPO7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Exportin 7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Exportin 7 em células tumorais com expressão de XPO7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.