Exportin 4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404233-ACT

XPO4 は、カリオフェリンβファミリーに属する核外輸送受容体であるエクスポーチン4をコードしており、RanGTP 依存的に、選択的なタンパク質カーゴを核から細胞質へ輸送します。エクスポーチン4は制御タンパク質の細胞内局在を調節することで、核—細胞質間輸送、転写制御、さらに広範なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）プログラムに寄与します。核—細胞質輸送の破綻は、がん生物学をはじめとする増殖性状態やストレス関連状態で繰り返し見られる特徴であり、そのため XPO4 は、輸送ダイナミクスがシグナル伝達の出力をどのように作り替えるかを研究するうえで有用な結節点となります。XPO4 の機能解析は、輸送、細胞周期制御、ストレス応答の間にある経路クロストークの機構解明研究を支えます。

Exportin 4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性XPO4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Exportin 4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における XPO4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXPO4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Exportin 4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXPO4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるExportin 4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXPO4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるExportin 4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。