Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Espin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403106
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Espin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Espin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Espin Antibody (E-7): sc-393469
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Espin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403106 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
ESPN codifica espin, una proteina che aggrega i filamenti di actina e che si localizza in fasci paralleli di filamenti di actina, risultando arricchita nei microvilli e nelle stereociglia. Espin regola l’architettura del citoscheletro, inclusi l’allungamento e la stabilizzazione delle protrusioni, modellando così la morfologia della superficie cellulare e le strutture meccanosensoriali. Attraverso la modulazione della dinamica dell’actina e della sua reticolazione, espin influenza processi quali l’organizzazione dell’orletto a spazzola epiteliale e il mantenimento delle stereociglia delle cellule ciliate. Alterazioni della funzione di ESPN sono state associate a fenotipi sensoriali e citoscheletrici rilevanti per la biologia dell’udito e per disturbi strutturali guidati dall’actina.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Espin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ESPN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ESPN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ESPN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Espin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ESPN per lo studio della segnalazione di Espin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni ESPN critici per la funzione di Espin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ESPN per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Espin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Espin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ESPN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Espin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Espin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ESPN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ESPN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.