Plásmido Doble Nickase (m) ErbB2/HER2: sc-420218-NIC

Erbb2 codifica la tirosina quinasa receptora ErbB2/HER2, un miembro de la familia EGFR/ErbB que actúa como socio preferente de heterodimerización para amplificar la señalización inducida por ligandos. Tras su activación, ErbB2 activa las cascadas PI3K–AKT–mTOR y RAS–RAF–MEK–ERK para regular la proliferación, la supervivencia, el metabolismo y la diferenciación, además de desempeñar funciones en la polaridad epitelial y el desarrollo de la glándula mamaria. La desregulación de la señalización de ErbB2 se asocia con la transformación oncogénica y con alteraciones del control del ciclo celular, lo que convierte a Erbb2 en un nodo ampliamente utilizado para estudiar la comunicación cruzada entre receptores y la integración de señales. Los modelos murinos de Erbb2 también se emplean para investigar fenotipos dependientes de la vía en contextos de desarrollo y de relevancia para enfermedades.

ErbB2/HER2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Erbb2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Erbb2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Erbb2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Erbb2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.