ErbB2/HER2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400138-ACT

ERBB2は、ERBB受容体型チロシンキナーゼファミリーの一員であるErbB2/HER2をコードしており、EGFR/ERBB3に対する優先的なヘテロ二量体形成パートナーとして機能して、リガンド依存的シグナル伝達を増幅します。HER2を含む二量体はPI3K–AKT–mTORおよびRAS–RAF–MEK–ERKのカスケードを活性化し、細胞外からの刺激を増殖・生存・代謝リモデリング・細胞周期進行へと結び付けます。ERBB2の発現やコピー数の異常は、受容体のトラフィッキングやフィードバック制御を乱し、ネットワークのシグナル閾値を変化させるとともに転写プログラムを改変し得ます。その結果、ERBB2は、がん性シグナル伝達の生物学、受容体クロストーク、ならびにヒト疾患モデルにおける経路依存性の機構を研究する上で、広く解析されています。

ErbB2/HER2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ERBB2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ErbB2/HER2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ERBB2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はERBB2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ErbB2/HER2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のERBB2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるErbB2/HER2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびERBB2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるErbB2/HER2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。