Eps8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403249-ACT

EPS8（Eps8）は、EGFR経路の基質タンパク質をコードしており、受容体型チロシンキナーゼシグナル伝達とアクチン細胞骨格の再構成を統合します。Eps8はABI1やSOS1などのアダプタータンパク質と複合体を形成して機能し、Racの活性化、膜ラッフリング、フィロポディアおよびラメリポディアの動的制御を調節することで、増殖因子からの刺激を細胞形態と運動性に結び付けます。これらの役割を通じて、EGFR/ERBBネットワーク下流におけるエンドサイトーシス、接着、シグナル伝播などの過程にも影響を及ぼします。EPS8の発現量や経路カップリングの変化は、複数の疾患関連細胞コンテキストにおいて遊走異常や増殖シグナルの破綻と関連づけられており、細胞骨格シグナルの機構研究に有用な標的となっています。

Eps8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EPS8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Eps8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EPS8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEPS8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Eps8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEPS8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEps8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEPS8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEps8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。