EphA7 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420197-ACT

Il gene murino *Epha7* codifica EphA7, una tirosin-chinasi recettoriale dell’asse di segnalazione eftrina-A/Eph che media la comunicazione cellulare dipendente dal contatto per regolare il posizionamento cellulare, l’adesione e la guida repulsiva. La segnalazione di EphA7 coordina il rimodellamento del citoscheletro tramite le GTPasi della famiglia Rho e si integra con le vie associate a MAPK/ERK e PI3K per influenzare proliferazione, differenziamento e sopravvivenza in modo dipendente dal contesto. Nel sistema nervoso, EphA7 contribuisce alla guida degli assoni, alla connettività neuronale e alla formazione di confini durante lo sviluppo, con ulteriori ruoli riportati nell’organizzazione dei tessuti epiteliali e mesenchimali. Un’attività di EphA7 deregolata è stata associata ad alterazioni della patterning dello sviluppo ed è stata studiata in processi rilevanti per la malattia, come la migrazione/invasione delle cellule tumorali e il controllo anomalo della crescita.

EphA7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Epha7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EphA7 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Epha7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Epha7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EphA7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Epha7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EphA7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EphA7 nelle cellule tumorali con espressione di Epha7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.