EphA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403340-ACT

EPHA1 codifica EphA1, una tirosin-chinasi recettoriale della rete di segnalazione ephrin-A che regola la comunicazione cellulare dipendente dal contatto, il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione cellulare direzionale. In seguito al legame con un ligando ephrin, EphA1 attiva una segnalazione bidirezionale che interseca le vie delle GTPasi della famiglia Rho, MAPK/ERK e PI3K/AKT, contribuendo a modulare adesione, formazione di confini e organizzazione dei tessuti epiteliali. Un’espressione o una segnalazione deregolata di EPHA1 è stata associata ad alterazioni delle interazioni cellula–cellula e a fenotipi invasivi in diversi contesti patologici, supportandone l’uso come nodo meccanicistico per studiare la segnalazione guidata dal microambiente. EphA1 è inoltre implicata in processi legati all’angiogenesi e al crosstalk immuno–stromale, risultando rilevante per studi di genomica funzionale in cellule umane focalizzati su specifiche vie di segnalazione.

EphA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EPHA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EphA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EPHA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EPHA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EphA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EPHA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EphA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EphA1 nelle cellule tumorali con espressione di EPHA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.