envoplakin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420248

Panoramica

Il gene Evpl del topo codifica l’envoplachina, un citolinker della famiglia delle plachine che partecipa all’assemblaggio e alla stabilizzazione dell’involucro corneo negli epiteli stratificati. L’envoplachina funge da impalcatura per interazioni proteina-proteina che collegano i filamenti intermedi, i componenti delle giunzioni desmosomiali e complessi associati alla membrana, sostenendo l’integrità della barriera epidermica e mucosale durante la differenziazione. Grazie al suo ruolo nell’organizzazione del citoscheletro e nella maturazione delle giunzioni, EVPL è comunemente utilizzato per studiare l’omeostasi epiteliale, le risposte alle ferite e i processi di rimodellamento indotti da stress. Un’espressione o un’organizzazione alterata delle proteine dell’involucro corneo, inclusa l’envoplachina, è stata associata a disfunzione della barriera e a fenotipi cutanei infiammatori, rendendo EVPL rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle malattie epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO envoplakin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Evpl in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Evpl insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Evpl a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina envoplakin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Evpl per lo studio della segnalazione di envoplakin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Evpl critici per la funzione di envoplakin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Evpl per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal envoplakin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal envoplakin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Evpl. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal envoplakin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR envoplakin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Evpl per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Evpl definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.