Partículas Lentivirales de Activación (m) Emx2: sc-420170-LAC

El gen Emx2 de ratón codifica un factor de transcripción con homeobox que establece la identidad regional durante el desarrollo embrionario, con funciones destacadas en el prosencéfalo, la corteza cerebral y el patrón de los órganos sensoriales. EMX2 actúa en redes de regulación génica que coordinan la proliferación de progenitores, la diferenciación neuronal y la morfogénesis tisular, integrándose con vías de señalización del desarrollo como Wnt/β-catenina, FGF y BMP. En el sistema nervioso, Emx2 influye en la regionalización cortical y la organización laminar al regular programas transcripcionales que determinan el destino celular y la conectividad. La expresión o actividad desregulada de EMX2 se ha asociado con anomalías del neurodesarrollo y con estados de diferenciación alterados, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control génico del desarrollo y la especificación de linajes en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral Emx2 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Emx2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Emx2 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Emx2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Emx2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Emx2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.