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EMSYCRISPR激活质粒(h) | sc-405722-ACT | 20 µg | $397.00 |
EMSY 编码一种核内染色质相关蛋白,可与 BRCA2 结合,并参与调控 DNA 损伤应答、转录控制以及基因组稳定性的维持。通过与染色质重塑和修复因子的相互作用,EMSY 能影响同源重组能力、复制应激信号传导以及细胞周期检查点的协同调控。EMSY 的表达水平或拷贝数改变与 DNA 修复能力失调及支持多种肿瘤环境中致癌表型的转录程序异常相关。因此,EMSY 常被用于研究连接染色质动态、BRCA2 相关修复生物学与由基因组不稳定性驱动的疾病机制的通路。
EMSY CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性EMSY的表达。
EMSY CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的EMSY基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于EMSY转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性EMSY表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的EMSY位点,并能够研究内源性位点上依赖于EMSY的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在EMSY表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟EMSY通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。