Elongin B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402154-ACT

ELOBはヒトのElongin Bをコードしており、SOCSボックス型およびVHL様アダプタータンパク質を安定化し、Cullin-RING型E3ユビキチンリガーゼ（CRL）のアセンブリを支えるElongin BC複合体の中核構成要素です。これらの複合体を介して、Elongin Bはユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）に寄与するとともに、RNAポリメラーゼIIの伸長や酸素感知経路に関連する転写プログラムの制御にも関与します。ELOB関連のリガーゼ複合体は、主要なシグナル伝達因子や細胞周期制御因子のターンオーバーに影響を与え、Elongin Bの機能を細胞ストレス応答、増殖制御、ゲノム完全性と結び付けています。Elongin BC依存的なユビキチン化の破綻は、がん化シグナルや低酸素応答の変調に関与するとされており、ELOBはタンパク質分解ネットワークの作用機序研究に有用な結節点となります。

Elongin B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELOBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Elongin B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELOB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELOB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Elongin Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELOB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるElongin B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELOB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるElongin B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。