Elongin A3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418260-ACT

TCEB3C codifica a Elongin A3, um membro da família Elongin A implicado no controlo transcricional pela RNA polimerase II e na modulação do alongamento da transcrição. Por meio de interações com complexos de elongina e com assemblies proteicos associados à transcrição, a Elongin A3 está ligada à regulação de programas de expressão génica que coordenam transições de estado celular, respostas adaptativas ao stress e processos relacionados com a proteostase. Alterações de expressão ou do contexto de vias que envolvem o controlo do alongamento e a regulação ubiquitina–proteassoma são frequentemente exploradas em biologia do cancro e noutras doenças caracterizadas por desregulação transcricional, tornando a TCEB3C um nó útil para estudos mecanísticos. Assim, a função da Elongin A3 humana é relevante para investigar como o output transcricional é ajustado ao longo de vias de sinalização e estados da cromatina.

Elongin A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCEB3C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Elongin A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCEB3C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCEB3C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Elongin A3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCEB3C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Elongin A3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Elongin A3 em células tumorais com expressão de TCEB3C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.