Elongin A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404668-ACT

ELOA はヒト Elongin A をコードしており、RNA ポリメラーゼ II のプロセシビティを高め、転写が活発な遺伝子全体にわたる効率的な mRNA 合成を支える転写伸長因子です。Elongin A はまた、停止した転写装置のターンオーバー制御に関与する Elongin 複合体と会合することで、ユビキチン依存的な品質管理経路にも関与し、転写ストレスをプロテオスタシス（タンパク質恒常性）に結び付けます。これらの機能を通じて、ELOA は細胞周期の進行、DNA 損傷応答、ならびに細胞ストレスへの適応を司る遺伝子発現プログラムに寄与します。Elongin A が関与する転写伸長やユビキチン介在性制御機構の破綻は、がん遺伝子性の転写プログラムやゲノム維持の欠陥に関連する状況で示唆されており、機構解明研究に有用なノードとなります。

Elongin A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELOAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Elongin A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELOA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELOA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Elongin Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELOA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるElongin A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELOA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるElongin A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。