elastin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-400640-KO-2

Übersicht

Das humane **ELN**-Gen kodiert Elastin, ein stark quervernetztes Protein der extrazellulären Matrix, das elastischen Fasern in Arterien, Lunge und Haut Elastizität und Rückstellkraft verleiht. Die Elastinassemblierung umfasst mikrofibrilläre Gerüststrukturen und eine durch Lysyl-Oxidase vermittelte Quervernetzung; dies unterstützt die Gefäßcompliance und die Gewebemechanik und beeinflusst zugleich das Zellverhalten über Matrix-Integrin-Signalwege und Mechanotransduktionspfade. Eine Störung von **ELN** beeinträchtigt die Bildung elastischer Fasern und die Homöostase der extrazellulären Matrix und verändert dadurch den Phänotyp glatter Muskelzellen sowie die Organisation des Bindegewebes. Eine **ELN**-Dysfunktion ist mit Erkrankungen der Gefäß- und Bindegewebsintegrität assoziiert, darunter die supravalvuläre Aortenstenose, Cutis laxa und weitere elastinbedingte Arteriopathien.

Das elastin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ELN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ELN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ELN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die elastin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ELN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der elastin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ELN-Exone abzielen, die für die elastin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ELN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom elastin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom elastin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ELN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das elastin HDR-Plasmid (h) und elastin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ELN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ELN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.