elastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-400640-KO-2

概要

ヒトのELN遺伝子は、動脈・肺・皮膚の弾性線維に弾力性と反発力を与える、高度に架橋された細胞外マトリックスタンパク質であるエラスチンをコードしています。エラスチンの組み立てには、ミクロフィブリルの足場構造とリシルオキシダーゼ（LOX）による架橋形成が関与し、血管のコンプライアンスや組織の力学特性を支えるとともに、マトリックス–インテグリンシグナルやメカノトランスダクション経路を介して細胞挙動にも影響を及ぼします。ELNが破綻すると弾性線維の形成と細胞外マトリックスの恒常性が乱れ、平滑筋細胞の表現型や結合組織の構築が変化します。ELN機能不全は、上大動脈弁上狭窄（supravalvular aortic stenosis）、弛緩皮膚症（cutis laxa）、その他のエラスチン関連動脈症など、血管および結合組織の構造的健全性に関わる疾患と関連しています。

elastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるELN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ELN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ELNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、elastinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、elastinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ELN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• elastinの機能に不可欠なELNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ELNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• elastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびelastin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ELN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  elastin HDRプラスミド（h）および elastin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはELNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のELN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。