eIF4AIII Double Nickaseプラスミド (h): sc-402660-NIC

EIF4A3は、DEADボックス型RNAヘリカーゼであるeIF4AIIIをコードしており、エクソンジャンクション複合体（EJC）の中核構成要素として機能します。eIF4AIIIは、pre-mRNAスプライシングを下流のmRNA輸送、局在化、翻訳、ならびにナンセンス変異依存mRNA分解（NMD）と結び付けます。eIF4AIIIはATP依存的にRNAにクランプすることで、スプライシング後のメッセンジャーRNPの構造形成を助け、転写産物の監視機構やプロテオームの忠実性に影響を与えます。EIF4A3の機能または発現の変化は、神経発生に関わる表現型や、がんに関連した遺伝子発現変化に結び付くRNAプロセシングプログラムの破綻と関連付けられています。このためEIF4A3は、RNA代謝を制御する経路、ゲノムワイドなスプライシングの帰結、そしてストレス応答性の翻訳制御に関する研究で頻繁に解析されています。

eIF4AIII ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EIF4A3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EIF4A3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EIF4A3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EIF4A3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。