Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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eIF4AIII Double Nickase Plasmid (h): sc-402660-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das eIF4AIII Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- eIF4AIII Double-Nickase-Plasmid (h) und eIF4AIII Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF4A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: eIF4AIII: sc-365549
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
eIF4AIII Double Nickase Plasmid (h) | sc-402660-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF4AIII Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402660-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4A3 kodiert eIF4AIII, eine DEAD-Box-RNA-Helikase, die als Kernbestandteil des Exon-Junction-Complex (EJC) dient und das Spleißen von Prä‑mRNA mit nachgeschalteten Prozessen wie mRNA-Export, -Lokalisation, -Translation und dem nonsense-mediated decay (NMD) koppelt. Indem eIF4AIII in ATP-abhängiger Weise an RNA „anklemmt“, trägt es dazu bei, die Architektur von mRNPs nach dem Spleißen festzulegen, und beeinflusst die Transkriptüberwachung sowie die Genauigkeit des Proteoms. Eine veränderte Funktion oder Expression von EIF4A3 wurde mit fehlregulierten RNA‑Verarbeitungsprogrammen in Verbindung gebracht, die für neuroentwicklungsbezogene Phänotypen und krebsassoziierte Veränderungen der Genexpression relevant sind. Daher wird EIF4A3 häufig in Signalwegen untersucht, die den RNA‑Stoffwechsel, genomweite Spleißresultate und eine stressresponsive Kontrolle der Translation steuern.
eIF4AIII Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.