eIF3ζ Plasmide Double Nickase (m): sc-424946-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF3ζ Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il eIF3ζ Double Nickase Plasmid (m) e il eIF3ζ Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Eif3d. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF3ζ Antibody (H-7): sc-271515
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF3ζ Plasmide Double Nickase (m) | sc-424946-NIC | 20 µg | $410.00 |
Eif3d codifica la subunità zeta del fattore eucariotico di inizio della traduzione 3 del topo (eIF3ζ), un componente del complesso multiproteico eIF3 che coordina l’assemblaggio del complesso di preinizio 43S e promuove una traduzione dell’mRNA cap-dipendente efficiente. Regolando l’efficienza di inizio e la selezione degli mRNA, eIF3ζ influenza l’omeostasi del proteoma e si integra con le vie di segnalazione che controllano crescita, adattamento allo stress e progressione del ciclo cellulare, incluso il controllo traduzionale regolato da mTOR. Le alterazioni dei fattori di inizio della traduzione sono spesso associate a modifiche della proliferazione e della fitness cellulare, rendendo Eif3d un locus utile per studiare programmi di sintesi proteica deregolati in contesti rilevanti per la malattia.
eIF3ζ Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Eif3d nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Eif3d. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Eif3d. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Eif3d interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.