eIF2α Double Nickaseプラスミド (h): sc-400199-NIC

EIF2S1 は、真核生物翻訳開始因子 2 の α サブユニット（eIF2α）をコードしており、キャップ依存的翻訳開始の中枢的な制御因子であると同時に、統合ストレス応答（ISR）の要となる分子です。PERK（EIF2AK3）、GCN2（EIF2AK4）、PKR（EIF2AK2）、HRI（EIF2AK1）といったストレス応答性キナーゼによる Ser51 のリン酸化は、三者複合体の利用可能量を低下させ、全体的なタンパク質合成を抑制する一方で、選択的な翻訳プログラムを可能にします。このシグナル軸は、ATF4 や CHOP/DDIT3 などの下流エフェクターを介して、プロテオスタシス、ER ストレス適応、オートファジー、自然免疫応答を協調的に制御します。eIF2α シグナルの破綻は、神経変性、がん細胞のストレス耐性、ウイルス感染に対する応答、代謝ストレスなどの文脈で関与が示されており、EIF2S1 は翻訳制御機構を探るための広く用いられる標的となっています。

eIF2α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EIF2S1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EIF2S1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EIF2S1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EIF2S1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。