Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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eIF2α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420141
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- eIF2α Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico eIF2α, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: eIF2α Antibody (D-3): sc-133132
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
eIF2α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420141 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Eif2s1 codifica la subunità alfa del fattore eucariotico di inizio della traduzione 2 (eIF2α), un regolatore centrale dell’avvio della traduzione cap-dipendente e della scansione dell’mRNA, grazie al suo ruolo nel trasporto del Met-tRNAi iniziatore al ribosoma. La fosforilazione di eIF2α in Ser51 integra la risposta integrata allo stress (ISR) a valle di chinasi come PERK, PKR, GCN2 e HRI, reprimendo la sintesi proteica globale e al contempo favorendo programmi di traduzione selettivi, inclusa la trascrizione dipendente da ATF4. Questo nodo collega stress del RE, deprivazione di aminoacidi, rilevamento virale e stress ossidativo alle decisioni di proteostasi, autofagia e apoptosi. La disregolazione della segnalazione di eIF2α è ampiamente studiata nel contesto della neurodegenerazione, della biologia dello stress metabolico, dell’adattamento delle cellule tumorali e della segnalazione infiammatoria.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO eIF2α (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Eif2s1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Eif2s1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Eif2s1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina eIF2α.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Eif2s1 per lo studio della segnalazione di eIF2α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Eif2s1 critici per la funzione di eIF2α
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Eif2s1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal eIF2α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal eIF2α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Eif2s1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal eIF2α Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR eIF2α (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Eif2s1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Eif2s1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.