eIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400199

概要

EIF2S1は、真核生物翻訳開始因子2のαサブユニット（eIF2α）をコードしており、キャップ依存的な翻訳開始とプロテオスタシス（タンパク質恒常性）を統括する中枢的な制御因子です。eIF2αのSer51残基のリン酸化は、複数のストレス感知キナーゼ（PERK/EIF2AK3、GCN2/EIF2AK4、PKR/EIF2AK2、HRI/EIF2AK1）からのシグナルを統合し、三者複合体の利用可能性を調節することで、全体的なタンパク質合成を抑制すると同時に、統合ストレス応答（ISR）におけるATF4などの選択的翻訳プログラムを促進します。この経路を通じて、eIF2αは小胞体ストレス、アミノ酸欠乏、ウイルス検知、酸化ストレスを、適応的な転写・翻訳の再編へと結び付けます。eIF2αシグナルの破綻は、翻訳制御やストレス顆粒ダイナミクスの変化を介して、がん細胞のストレス耐性、神経変性疾患におけるタンパク質凝集の表現型、さらに代謝・炎症状態などに関与すると考えられています。

eIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEIF2S1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EIF2S1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EIF2S1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF2αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF2αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EIF2S1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF2αの機能に不可欠なEIF2S1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EIF2S1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびeIF2α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EIF2S1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF2α HDRプラスミド（h）および eIF2α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEIF2S1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEIF2S1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。