eIF2α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400199-ACT

EIF2S1 codifica a subunidade alfa do fator eucariótico humano de iniciação da tradução 2 (eIF2α), um regulador central do início da tradução de mRNA e da proteostase. A fosforilação de eIF2α em Ser51 integra sinais da resposta integrada ao estresse (ISR) por meio de quinases como PERK, GCN2, PKR e HRI, reduzindo a síntese proteica global enquanto favorece programas de tradução seletiva, como o ATF4. Por esse mecanismo, o EIF2S1 conecta estresse do RE, privação de nutrientes, detecção de vírus e estresse oxidativo a uma remodelação adaptativa transcricional e metabólica. A desregulação da sinalização de eIF2α tem sido implicada em contextos como neurodegeneração, tolerância ao estresse em células cancerígenas e fisiopatologia inflamatória, tornando a modulação de EIF2S1 útil para dissecar essa via.

eIF2α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EIF2S1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF2α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EIF2S1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EIF2S1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF2α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EIF2S1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF2α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF2α em células tumorais com expressão de EIF2S1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.