eIF2α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400199-ACT

EIF2S1は、mRNA翻訳開始およびプロテオスタシスの中核的な制御因子であるヒト真核生物翻訳開始因子2のαサブユニット（eIF2α）をコードします。Ser51におけるeIF2αのリン酸化は、PERK、GCN2、PKR、HRIなどのキナーゼを介した統合ストレス応答（ISR）からのシグナルを統合し、全体的なタンパク質合成を低下させる一方で、ATF4などの選択的な翻訳プログラムを促進します。この機構を通じてEIF2S1は、小胞体（ER）ストレス、栄養欠乏、ウイルス検知、酸化ストレスを、適応的な転写および代謝の再構築へと結び付けます。eIF2αシグナルの破綻は、神経変性、がん細胞のストレス耐性、炎症性病態生理などのさまざまな文脈で関与が示されており、EIF2S1の調節は経路の解析に有用です。

eIF2α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF2S1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF2α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF2S1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF2S1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF2αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF2S1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF2α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF2S1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF2α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。