Egr-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401203-ACT

EGR2 codifica o fator de transcrição Egr-2, do tipo zinc-finger, um gene de resposta imediata que regula programas de transcrição responsivos a estímulos, controlando decisões de destino celular, diferenciação e homeostase tecidual. Nos sistemas imune e nervoso humanos, o Egr-2 contribui para redes transcricionais que moldam a anergia/tolerância de células T e o desenvolvimento de nervos periféricos, integrando sinais a jusante de MAPK/ERK e de outras vias dependentes de atividade. Alterações na expressão ou na função de EGR2 têm sido associadas à desregulação imune e a fenótipos de neuropatia periférica, tornando-o um nó útil para estudar o controle transcricional da inflamação e processos relacionados à mielinização. Como regulador que se liga ao DNA, o Egr-2 oferece um modelo acessível para dissecar a lógica de promotores/realçadores (enhancers) e o circuito regulatório gênico a jusante em tipos celulares relevantes para doenças.

Egr-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EGR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Egr-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EGR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EGR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Egr-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EGR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Egr-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Egr-2 em células tumorais com expressão de EGR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.