EGFR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400015-ACT

O recetor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) é uma tirosina‑quinase recetora humana que inicia cascatas de sinalização que controlam a proliferação, sobrevivência, diferenciação e migração celulares após a dimerização induzida por ligando e a autofosforilação. O EGFR ativa vias centrais, incluindo RAS–RAF–MEK–ERK, PI3K–AKT–mTOR, PLCγ–PKC e JAK–STAT, integrando sinais extracelulares de crescimento com programas transcricionais e metabólicos. A expressão ou sinalização desregulada do EGFR é frequentemente associada a alterações da homeostase epitelial e a fenótipos oncogénicos, tornando-o um nó central na biologia dos recetores de fatores de crescimento. O EGFR também é amplamente utilizado como recetor modelo para estudar o tráfego de recetores, a endocitose, a regulação por feedback e a comunicação cruzada entre vias em sistemas celulares humanos.

EGFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EGFR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EGFR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EGFR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EGFR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EGFR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EGFR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EGFR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EGFR em células tumorais com expressão de EGFR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.