EFP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402678

概要

TRIM25は、自然免疫シグナル伝達およびRNA代謝を制御するユビキチン化反応を触媒する、TRIMファミリータンパク質であるE3ユビキチンリガーゼEFPをコードしている。EFPはRIG-Iをユビキチン化して活性化することで抗ウイルス応答を促進し、MAVS、TBK1、IRF3/7を介した下流のI型インターフェロンシグナル伝達を助長するほか、NF-κB関連の炎症性アウトプットを調節し得る。宿主防御にとどまらず、TRIM25はRNA結合タンパク質との相互作用を介して転写後制御にも関与し、細胞周期やストレス応答プログラムにも影響を及ぼす。TRIM25活性の破綻は、インターフェロンの基調（トーン）の変化、ウイルス感受性の変動、そして腫瘍生物学や内分泌シグナルにおける状況依存的な役割と関連づけられており、炎症およびがん研究における重要な結節点となっている。

EFP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRIM25遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRIM25内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRIM25のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EFPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EFPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRIM25欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EFPの機能に不可欠なTRIM25エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRIM25ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EFP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEFP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRIM25遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EFP HDRプラスミド（h）および EFP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRIM25ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRIM25標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。