EDG-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420644

Visão geral

Lpar1 codifica o EDG-2, um receptor acoplado à proteína G para o ácido lisofosfatídico (LPA) que converte sinais lipídicos extracelulares em programas intracelulares que controlam a migração, proliferação e sobrevivência celular, bem como a remodelação do citoesqueleto. O EDG-2 aciona principalmente as vias de Gαi/o, Gαq/11 e Gα12/13 para ativar PI3K–AKT, a sinalização PLC–Ca2+ e a dinâmica de actina mediada por RhoA/ROCK, influenciando a adesão e a contratilidade. Em tecidos de camundongo, a sinalização de Lpar1 contribui para processos de neurodesenvolvimento, respostas vasculares e de fibroblastos e o tráfego de células imunes por meio da regulação da quimiotaxia e da função de barreira. A atividade desregulada de LPA–EDG-2 tem sido implicada em remodelamento inflamatório e fibrótico e em mecanismos relevantes para a motilidade de células tumorais e a comunicação com o microambiente, sustentando sua utilidade em modelos de doença centrados em vias de sinalização.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EDG-2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Lpar1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Lpar1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Lpar1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EDG-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Lpar1 para a investigação da sinalização de EDG-2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Lpar1 críticos para a função EDG-2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Lpar1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo EDG-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo EDG-2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Lpar1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo EDG-2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR EDG-2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Lpar1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Lpar1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.