EAF1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-428881-ACT

O gene Eaf1 de camundongo codifica a EAF1, um cofator nuclear de transcrição originalmente caracterizado como um fator associado à ELL que ajuda a coordenar o alongamento da RNA polimerase II e programas de expressão gênica. A EAF1 participa de complexos regulatórios associados à cromatina e tem sido relacionada ao controle da progressão do ciclo celular, da diferenciação e de respostas transcricionais a estresse. Por meio de seu papel na regulação transcricional, a EAF1 pode influenciar vias que governam a proliferação e redes gênicas do desenvolvimento, tornando-a relevante para estudos de transcrição desregulada na biologia do câncer e em outros contextos em que o controle da expressão gênica é perturbado. Investigar a função de Eaf1 apoia a dissecação mecanística do alongamento transcricional e de eventos regulatórios proximais ao promotor em células de mamíferos.

EAF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Eaf1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EAF1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Eaf1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Eaf1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EAF1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Eaf1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EAF1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EAF1 em células tumorais com expressão de Eaf1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.