Dynein IC2, cytosolic Double Nickase Plasmid (h): sc-402079-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dynein IC2, cytosolic Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dynein IC2, cytosolic Double-Nickase-Plasmid (h) und Dynein IC2, cytosolic Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DYNC1I2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dynein IC2, cytosolic Double Nickase Plasmid (h) | sc-402079-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dynein IC2, cytosolic Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402079-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DYNC1I2 kodiert die zytoplasmatische Dynein-1-Intermediatkette 2 (Dynein IC2), eine Kernuntereinheit des minusendgerichteten Mikrotubuli-Motorkomplexes, der Dynein mit Dynactin und verschiedenen Cargo-Adaptern koppelt. Dieses Motorsystem unterstützt den intrazellulären Transport von Endosomen, Lysosomen und Golgi-abgeleiteten Vesikeln sowie die Positionierung des Zentrosoms, die Organisation der mitotischen Spindel und den für die neuronale Homöostase erforderlichen retrograden Transport. Die Funktion von Dynein IC2 ist in Signalwege des mikrotubulibasierten Transports, der Zellzyklusprogression und der Organellendynamik eingebunden, die Polarität und Proteostase prägen. Veränderungen der Dynein–Dynactin-Maschinerie wurden mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen sowie weiteren Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit gestörtem axonalem Transport und fehlerhafter mitotischer Genauigkeit zusammenhängen, wodurch DYNC1I2 einen hilfreichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien darstellt.
Dynein IC2, cytosolic Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DYNC1I2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DYNC1I2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DYNC1I2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DYNC1I2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.