Dynactin 6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406516

Panoramica

DCTN6 codifica la subunità 6 della dinactina, un componente del complesso della dinactina che coopera con la dineina citoplasmatica per sostenere il trasporto basato sui microtubuli. La dinactina aiuta a collegare la dineina a carichi diversi e contribuisce al traffico intracellulare, alla motilità delle vescicole e all’organizzazione del citoscheletro, influenzando il posizionamento degli organelli e i processi mitotici. Attraverso questi ruoli, la dinactina 6 può influenzare vie che regolano la dinamica endosoma–lisosoma, la funzione del centrosoma e la fedeltà della divisione cellulare. Alterazioni del trasporto dipendente da dineina–dinactina sono state associate a fenotipi neurologici e proliferativi, rendendo DCTN6 rilevante per studi sull’omeostasi cellulare e sui meccanismi di malattia che coinvolgono difetti di traffico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynactin 6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCTN6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCTN6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCTN6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dynactin 6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCTN6 per lo studio della segnalazione di Dynactin 6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DCTN6 critici per la funzione di Dynactin 6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCTN6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dynactin 6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dynactin 6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCTN6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dynactin 6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dynactin 6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCTN6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCTN6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.