Dynactin 6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406516

Übersicht

DCTN6 kodiert die Dynactin‑Untereinheit 6, einen Bestandteil des Dynactin‑Komplexes, der mit dem zytoplasmatischen Dynein zusammenwirkt und den mikrotubuli‑basierten Transport unterstützt. Dynactin trägt dazu bei, Dynein mit unterschiedlichen Frachtgütern zu koppeln, und leistet Beiträge zum intrazellulären Transport, zur Vesikelbeweglichkeit sowie zur Organisation des Zytoskeletts, die die Positionierung von Organellen und mitotische Prozesse beeinflussen. Über diese Funktionen kann Dynactin 6 Signalwege beeinflussen, die die Endosom‑Lysosom‑Dynamik, die Centrosomenfunktion und die Genauigkeit der Zellteilung steuern. Störungen des dynein‑dynactin‑abhängigen Transports wurden mit neurologischen und proliferativen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch DCTN6 für Untersuchungen der zellulären Homöostase und von Krankheitsmechanismen mit Transportdefekten relevant ist.

Das Dynactin 6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DCTN6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DCTN6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DCTN6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dynactin 6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DCTN6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dynactin 6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DCTN6-Exone abzielen, die für die Dynactin 6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DCTN6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dynactin 6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dynactin 6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DCTN6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dynactin 6 HDR-Plasmid (h) und Dynactin 6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DCTN6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DCTN6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.