Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400785

Übersicht

DVL1 kodiert Dishevelled 1 (Dvl-1), ein zytoplasmatisches Phosphoprotein, das als zentrales Gerüstprotein in der Wnt-Signaltransduktion fungiert. Dvl-1 integriert rezeptornahe Signale von Frizzled und Korezeptoren, um sowohl die β-Catenin-abhängige (kanonische) als auch die planare Zellpolarität/Wnt–Ca²⁺- (nicht-kanonische) Signalgebung weiterzuleiten, und beeinflusst dadurch Zellpolarität, Migration und transkriptionelle Programme. Über seine DIX-, PDZ- und DEP-Domänen koordiniert Dvl-1 Multiproteinkomplexe, die die Stabilisierung von β-Catenin, die Signalübertragung kleiner GTPasen und den Umbau des Zytoskeletts regulieren. Eine Fehlregulation der Wnt/Dishevelled-Signalgebung ist häufig mit veränderten Entwicklungsmusterungen und der Aktivierung onkogener Signalwege verknüpft, weshalb DVL1 einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Umverdrahtung von Signalwegen in krankheitsassoziierten Kontexten darstellt.

Das Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DVL1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DVL1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DVL1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DVL1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DVL1-Exone abzielen, die für die Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DVL1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DVL1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 HDR-Plasmid (h) und Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DVL1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DVL1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.