DRP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400459-NIC

DNM1Lはダイナミン関連タンパク質1（DRP1）をコードしており、DRP1は大型のGTPアーゼとして、ミトコンドリア外膜上に集合してアダプタータンパク質（FIS1、MFF、MID49/51など）と協調しながら膜を収縮させ、ミトコンドリア分裂を統括します。ミトコンドリアネットワークの構造を制御することで、DRP1は酸化的リン酸化、活性酸素種（ROS）の制御、ミトコンドリアDNAの分配、ならびにマイトファジーによるオルガネラ品質管理に影響を与えます。DRP1依存的なダイナミクスはアポトーシスのシグナル伝達や代謝適応と密接に連動しており、DNM1L活性を細胞ストレス応答と生体エネルギー恒常性を司る経路に結び付けています。DRP1機能の破綻とミトコンドリアの断片化は、神経発達・神経変性の表現型、心代謝機能障害、がん細胞の生存プログラムと関連しており、そのためDNM1Lはミトコンドリア生物学の機構研究における一般的な標的となっています。

DRP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DNM1L 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DNM1L内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DNM1Lの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DNM1Lが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。