DR4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400747-ACT

TNFRSF10A codifica o receptor de morte 4 (DR4), um membro de superfície celular da superfamília de receptores de TNF que se liga ao TRAIL para iniciar a apoptose extrínseca. Após o engajamento do ligante, o DR4 monta o complexo de sinalização indutor de morte, promove a ativação da caspase-8 e pode convergir com a apoptose mitocondrial por meio da clivagem de BID, conectando a sinalização do receptor a um controle mais amplo do destino celular. A atividade do DR4 integra-se ao crosstalk das vias de NF-κB e MAPK, que pode influenciar a sinalização inflamatória e as respostas ao estresse, tornando-o um nó útil para estudar desfechos dependentes do contexto entre sobrevivência e morte. Alterações na expressão de TNFRSF10A ou na responsividade da via foram relatadas em diversos tipos de câncer e em contextos relacionados ao sistema imune, sustentando pesquisas mecanísticas sobre competência apoptótica, vigilância imune e fenótipos de resistência.

DR4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF10A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DR4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF10A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF10A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DR4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF10A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DR4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DR4 em células tumorais com expressão de TNFRSF10A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.