DP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422478

概要

Ptgdrは、マウスのプロスタグランジンD2受容体DPをコードする遺伝子であり、主にGsを介してシグナル伝達を行うGタンパク質共役型受容体（GPCR）です。これによりcAMPが上昇し、PKA依存的な転写プログラムが作動します。DPは、アラキドン酸代謝によって産生されるPGD2によって活性化され、平滑筋緊張、血管透過性、粘膜炎症、免疫細胞の遊走の調節に寄与します。白血球やバリア組織では、DPを介したシグナル伝達がサイトカイン産生や走化性と連動し、2型炎症反応や神経―免疫間コミュニケーションを形成します。PGD2–DP活性の異常は、喘息様の気道炎症、アレルギー疾患、炎症性疼痛経路に関する実験モデルで関与が示されており、Ptgdrは脂質メディエーターシグナル伝達を解析するうえで有用な標的となります。

DP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPtgdr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ptgdr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ptgdrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ptgdr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DPの機能に不可欠なPtgdrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ptgdrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ptgdr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DP HDRプラスミド（m）および DP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPtgdrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPtgdr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。