Dnmt3a Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420035-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dnmt3a Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Dnmt3a CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Dnmt3a CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Dnmt3a CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Dnmt3a. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dnmt3a Antibody (C-12): sc-365769
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dnmt3a Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-420035-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il gene murino Dnmt3a codifica una DNA metiltransferasi de novo che stabilisce i pattern di metilazione CpG durante lo sviluppo e l’impegno del destino cellulare, modulando l’accessibilità della cromatina e programmi trascrizionali di lunga durata. DNMT3A coopera con DNMT3B e DNMT1 per mantenere la memoria epigenetica, collegando la metilazione del DNA alle reti di modificazione degli istoni e alla repressione trascrizionale. La sua attività influenza la differenziazione, l’imprinting genomico e il silenziamento dei trasposoni; inoltre, la disregolazione della metilazione dipendente da DNMT3A è associata a un’alterata specificazione di linea e a instabilità epigenetica in modelli di malattia. Dnmt3a è quindi ampiamente studiato nelle vie che regolano la biologia delle cellule staminali, la regolazione ematopoietica e il controllo dell’espressione genica dipendente dalla metilazione.
Dnmt3a Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Dnmt3a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Dnmt3a Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Dnmt3a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Dnmt3a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Dnmt3a. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Dnmt3a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Dnmt3a nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Dnmt3a nelle cellule tumorali con espressione di Dnmt3a silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.