DnaJC13 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411713-ACT

DNAJC13 codifica a DnaJC13, uma co-chaperona com domínio J implicada no tráfego mediado por clatrina e na reciclagem endossomal, onde ajuda a coordenar o controlo de qualidade das proteínas com a dinâmica das vesículas. A proteína está associada à rede retromer/WASH e contribui para decisões de triagem que afetam a renovação de recetores, a reciclagem de proteínas de membrana e o transporte do endossoma para o Golgi. Por meio dessas funções, DNAJC13 influencia a homeostase da sinalização e as vias de proteostase que são sensíveis a defeitos de tráfego. Estudos genéticos e funcionais ligaram a atividade alterada de DNAJC13 a processos relevantes para a neurodegeneração, incluindo perturbações na função endolisossomal e no processamento de proteínas sinápticas.

DnaJC13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNAJC13 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DnaJC13 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNAJC13 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNAJC13, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DnaJC13. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNAJC13 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DnaJC13 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DnaJC13 em células tumorais com expressão de DNAJC13 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.