DNA pol γCRISPR激活质粒(h): sc-401870-ACT

POLG 编码 DNA 聚合酶 γ（polymerase γ），这是线粒体中主要的复制型聚合酶，与 TWNK 解旋酶和线粒体单链 DNA 结合蛋白协同完成线粒体 DNA（mtDNA）的复制与修复。通过维持 mtDNA 拷贝数和基因组完整性，DNA 聚合酶 γ 支持氧化磷酸化、线粒体生物发生以及核苷酸稳态。POLG 功能受扰与 mtDNA 耗竭及缺失累积相关，将线粒体基因组不稳定性与神经肌肉和神经退行性疾病表型联系起来。由于线粒体功能障碍会影响细胞凋亡、先天免疫信号传导和细胞代谢，POLG 常被用于研究将生物能量学与应激反应耦联的相关通路。

DNA pol γ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性POLG的表达。

DNA pol γ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的POLG基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于POLG转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性DNA pol γ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的POLG位点，并能够研究内源性位点上依赖于DNA pol γ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在POLG表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟DNA pol γ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。