DNA pol ε A Double Nickase Plasmid (m): sc-422339-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DNA pol ε A Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DNA pol ε A Double-Nickase-Plasmid (m) und DNA pol ε A Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pole abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DNA pol ε A: sc-12728
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DNA pol ε A Double Nickase Plasmid (m) | sc-422339-NIC | 20 µg | $410.00 |
Maus *Pole* kodiert die katalytische Untereinheit A der DNA-Polymerase Epsilon, einer hochfidelitäts‑Replikationspolymerase, die für die Leading‑Strang‑DNA‑Synthese während der S‑Phase essenziell ist. DNA‑Pol ε A koordiniert sich mit der CMG‑Helikase und Replikationsfaktor‑Komplexen, um das Fortschreiten des Replisoms, die abgestimmte Verarbeitung von Okazaki‑Fragmenten und eine präzise Genomduplikation zu unterstützen. Über die Replikation hinaus trägt *Pole* zur DNA‑Schadentoleranz und zu Antworten auf Replikationsstress bei und ist dabei mit Checkpoint‑Signalwegen verknüpft, die die Stabilität der Replikationsgabel erhalten. Eine Störung der Funktion replikativer Polymerasen ist eng mit Phänotypen der Genominstabilität verbunden, die in experimentellen Systemen häufig zur Modellierung mutationaler Prozesse und krebsrelevanter Defekte der DNA‑Replikation genutzt werden.
DNA pol ε A Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pole-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pole abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pole-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pole-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.