Plasmide Double Nickase (m) DNA-PKCS: sc-422405-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DNA-PKCS correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DNA-PKCS Double Nickase (m) et le plasmide DNA-PKCS Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Prkdc. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DNA-PKCS Antibody (G-12): sc-390849
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DNA-PKCS | sc-422405-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) DNA-PKCS | sc-422405-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Prkdc code la sous-unité catalytique de la protéine kinase dépendante de l’ADN, DNA-PKcs, un régulateur central de la réparation des cassures double brin de l’ADN via la voie de jonction d’extrémités non homologues (NHEJ). DNA-PKcs forme une holoenzyme active avec Ku70/Ku80 afin de coordonner la reconnaissance des extrémités, la synapsis et le traitement des extrémités, et participe à la recombinaison V(D)J ainsi qu’à la recombinaison de commutation de classe chez les lymphocytes en développement. En tant que composant majeur de la réponse aux dommages de l’ADN, DNA-PKcs influence la signalisation des points de contrôle du cycle cellulaire, la stabilité du génome et la sensibilité cellulaire au stress génotoxique. Une fonction PRKDC altérée est couramment utilisée pour modéliser des défauts de NHEJ, des phénotypes d’instabilité chromosomique et les mécanismes à l’origine de vulnérabilités de réparation de l’ADN pertinentes pour l’immunodéficience et le cancer dans des modèles murins.
DNA-PKCS Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Prkdc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Prkdc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Prkdc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Prkdc.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.