DMPK Plasmide Double Nickase (h): sc-402727-NIC

DMPK (dystrophia myotonica-protein kinase) codifica una chinasi serina/treonina localizzata in compartimenti citoplasmatici e associati alla membrana, e contribuisce alla regolazione del citoscheletro di actina, dell’adesione cellulare e dell’organizzazione miofibrillare. La segnalazione di DMPK interagisce con vie dipendenti dalle GTPasi della famiglia Rho e influenza l’eccitabilità cellulare e l’integrità strutturale nel muscolo e in altri tessuti. Alterazioni della biologia di DMPK sono strettamente collegate alla distrofia miotonica di tipo 1, in cui l’espansione delle ripetizioni CTG nel locus DMPK determina una disregolazione dello splicing alternativo mediata dall’RNA e difetti a valle nella funzione muscolare, cardiaca e neuronale. La modulazione sperimentale di DMPK è quindi utile per analizzare la segnalazione dipendente dalla chinasi e i meccanismi associati alle ripetizioni che influenzano l’architettura cellulare e il processamento dell’RNA.

DMPK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DMPK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DMPK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DMPK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DMPK interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.