Dmp1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402941

Panoramica

Il DMTF1 umano codifica Dmp1, un fattore di trascrizione di tipo Myb che regola la progressione del ciclo cellulare modulando l’asse ARF–MDM2–p53 e intersecandosi con il controllo RB/E2F-dipendente dei programmi trascrizionali della transizione G1/S. Dmp1 si lega a elementi promotori in geni che governano la proliferazione e le risposte ai checkpoint, influenzando così la senescenza cellulare, la segnalazione da stress e il controllo della crescita indotto da oncogeni. Alterazioni dell’attività o del dosaggio di DMTF1 sono state associate a proliferazione disregolata e a uno squilibrio della rete dei soppressori tumorali, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale delle decisioni di destino cellulare in contesti rilevanti per il cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dmp1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DMTF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DMTF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DMTF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dmp1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DMTF1 per lo studio della segnalazione di Dmp1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DMTF1 critici per la funzione di Dmp1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DMTF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dmp1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dmp1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DMTF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dmp1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dmp1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DMTF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DMTF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.