Dkk-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400540-ACT

O DKK1 humano codifica a proteína 1 relacionada a Dickkopf (Dkk-1), um antagonista secretado da sinalização canônica Wnt/β-catenina que se liga aos co-receptores LRP5/6 e modula a montagem do complexo receptor. Ao conter programas transcricionais dirigidos por Wnt, a Dkk-1 influencia decisões de destino celular, proliferação e diferenciação, com papéis de destaque no padrão embrionário e na remodelação óssea. A expressão desregulada de DKK1 está associada à atividade anômala da via Wnt observada em diferentes contextos de oncologia, inflamação e biologia de doenças musculoesqueléticas, nos quais pode remodelar interações entre estroma e tumor e processos osteolíticos. Como regulador em nível de via, o DKK1 é frequentemente investigado para mapear feedbacks da rede Wnt, gradientes de sinalização extracelular e saídas transcricionais dependentes de β-catenina.

Dkk-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DKK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dkk-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DKK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DKK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dkk-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DKK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dkk-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dkk-1 em células tumorais com expressão de DKK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.