Dia 2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403238-ACT

DIAPH2（Dia 2）は、アクチンフィラメントの核形成と伸長を制御するジアファナス関連フォルミンをコードしており、細胞骨格の再構築、細胞極性、細胞質分裂に寄与します。Rho GTPase連関シグナル伝達のエフェクターとして、DIAPH2は、膜輸送や微小管とのクロストークとアクチンダイナミクスを協調させることで、細胞遊走や接着などのプロセスを支えます。DIAPH2の活性や発現量（用量）の変化は、生殖生物学や腫瘍細胞の挙動といった文脈で研究されており、細胞骨格制御が染色体安定性や浸潤性表現型に影響することが示唆されています。生物医学研究では、DIAPH2はRho–フォルミンシグナルを形態形成、細胞周期進行、メカノトランスダクションに結び付けて理解するための対象として一般的に研究されています。

Dia 2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DIAPH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dia 2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DIAPH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDIAPH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dia 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDIAPH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDia 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDIAPH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDia 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。