desmoplakin I/II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430943

Visão geral

O gene **Dsp** de camundongo codifica a desmoplaquina I/II, um citoligador central dos desmossomos que ancora os filamentos intermediários aos complexos de caderinas desmossomais–plakoglobina/plakofilina, sustentando a integridade tecidual sob estresse mecânico. A desmoplaquina regula a adesão célula–célula, a organização do citoesqueleto e redes de sinalização juncional que coordenam a arquitetura do epitélio e do músculo cardíaco. A disfunção dos desmossomos altera a mecanotransdução e as propriedades de barreira, afetando processos como diferenciação epidérmica, resposta a feridas e o acoplamento entre cardiomiócitos. A disfunção de **Dsp** é amplamente utilizada como modelo de patobiologia relacionada a desmossomos, incluindo fenótipos de fragilidade cutânea e defeitos juncionais associados à cardiomiopatia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO desmoplakin I/II (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Dsp em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Dsp, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Dsp na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína desmoplakin I/II.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Dsp para a investigação da sinalização de desmoplakin I/II, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Dsp críticos para a função desmoplakin I/II
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Dsp para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo desmoplakin I/II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo desmoplakin I/II Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Dsp. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo desmoplakin I/II Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR desmoplakin I/II (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Dsp para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Dsp definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.