DDX30 Lentiviral Activation Particles (h): sc-411632-LAC

DHX30 kodiert DDX30, eine DEAD-Box-RNA-Helikase, die an der ATP-abhängigen Umgestaltung von RNA-Strukturen und Ribonukleoproteinkomplexen beteiligt ist. DDX30 trägt zur posttranskriptionellen Genregulation bei, einschließlich RNA-Prozessierung und translationsassoziierter Kontrolle, und wurde mit dem mitochondrialen RNA-Stoffwechsel sowie Programmen der zellulären Stressantwort in Verbindung gebracht. Über diese Funktionen kann die DHX30-Aktivität die Proteostase, die metabolische Homöostase und Ausgänge der angeborenen Immun-Signalübertragung beeinflussen, die von RNA-Sensorik und regulierter Genexpression abhängen. Eine Fehlregulation oder genetische Variation in DHX30 wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie breiteren transkriptionellen und translationalen Störungen assoziiert, die für die Krankheitsmodellierung in menschlichen Zellen relevant sind.

DDX30 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DHX30-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DDX30 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DHX30-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DDX30-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DHX30-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.