DDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416011

概要

DDI1（DNA damage inducible 1 homolog）は、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）やストレス応答に関与するとされる、進化的に保存されたタンパク質をコードします。また、ユビキチン様ドメインおよびレトロウイルスプロテアーゼドメインに相同性を有します。ヒト細胞では、DDI1はタンパク質のターンオーバーや遺伝毒性ストレスへの細胞適応に影響するユビキチン依存的プロセスと関連づけられており、ゲノム完全性の維持を支えることが示唆されています。これらの役割を通じて、DDI1はDNA損傷シグナル伝達、複製に伴うストレス、ならびにミスフォールドや損傷タンパク質の制御された分解を結びつける経路において研究されています。プロテオスタシスおよびストレス応答回路の破綻は、がん化や神経変性表現型の文脈でしばしば検討されるため、DDI1は機序解明研究に有用な標的となります。

DDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDDI1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DDI1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DDI1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DDI1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DDI1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DDI1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DDI1の機能に不可欠なDDI1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DDI1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDDI1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DDI1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DDI1 HDRプラスミド（h）および DDI1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDDI1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDDI1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。