Dcun1D4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409238

Übersicht

DCUN1D4 kodiert Dcun1D4, ein Mitglied der DCN1-ähnlichen Familie, das an der Regulation der Aktivität von Cullin-RING-E3-Ubiquitin-Ligasen beteiligt ist, indem es die Neddylierung von Cullinen steuert. Durch die Modulation der NEDD8-abhängigen Aktivierung von Cullin-Komplexen kann Dcun1D4 die ubiquitinvermittelte Proteostase, den Zellzyklusverlauf sowie Signalwege beeinflussen, die auf einen zeitgerechten Abbau von Substraten angewiesen sind. Eine veränderte Aktivität innerhalb der Neddylierungs–Ubiquitin-Achse ist allgemein relevant für Genomstabilität und Stressantwortprogramme, wodurch DCUN1D4 ein nützlicher Lokus zur Untersuchung der Wegspezifität in CRL-abhängigen Prozessen ist. Eine Fehlregulation der Ubiquitin- und Neddylierungsmaschinerie wird in zahlreichen Krankheitskontexten beobachtet, was mechanistische Studien zu DCUN1D4 in der zellulären Homöostase und bei Störungen von Signalwegen unterstützt.

Das Dcun1D4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DCUN1D4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DCUN1D4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DCUN1D4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Dcun1D4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DCUN1D4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Dcun1D4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DCUN1D4-Exone abzielen, die für die Dcun1D4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DCUN1D4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Dcun1D4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Dcun1D4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DCUN1D4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Dcun1D4 HDR-Plasmid (h) und Dcun1D4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DCUN1D4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DCUN1D4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.