Dcun1D4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409238

Visão geral

DCUN1D4 codifica a Dcun1D4, um membro da família DCN1-like implicada na regulação da atividade de ligases E3 de ubiquitina do tipo cullin-RING por meio do controle da neddilação das cullinas. Ao modular a ativação dependente de NEDD8 dos complexos de cullina, Dcun1D4 pode influenciar a proteostase mediada por ubiquitina, a progressão do ciclo celular e vias de sinalização que dependem da degradação oportuna de substratos. A atividade alterada no eixo neddilação–ubiquitina é amplamente relevante para a estabilidade do genoma e para programas de resposta ao estresse, tornando DCUN1D4 um locus útil para investigar a especificidade de vias em processos dependentes de CRLs. A desregulação da maquinaria de ubiquitina e neddilação é observada em múltiplos contextos de doença, sustentando estudos mecanísticos de DCUN1D4 na homeostase celular e na perturbação de vias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Dcun1D4 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DCUN1D4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DCUN1D4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DCUN1D4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Dcun1D4.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DCUN1D4 para a investigação da sinalização de Dcun1D4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DCUN1D4 críticos para a função Dcun1D4
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DCUN1D4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Dcun1D4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Dcun1D4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DCUN1D4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Dcun1D4 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Dcun1D4 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DCUN1D4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DCUN1D4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.