DCBLD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404343-ACT

DCBLD1 (discoidin, CUB e LCCL domain containing 1) codifica uma proteína transmembranar de passagem única implicada na comunicação célula–célula e célula–matriz por meio de interações mediadas pelo domínio extracelular. O DCBLD1 humano tem sido associado à regulação de redes de sinalização que influenciam a adesão, a motilidade e vias relacionadas a receptores tirosina-quinase, sustentando papéis na remodelação do citoesqueleto e em programas transcricionais dependentes do contexto. Alterações na expressão de DCBLD1 foram relatadas em conjuntos de dados abrangendo múltiplos tipos de tumores e fenótipos associados ao sistema vascular, sugerindo relevância para processos como invasão, migração relacionada à metástase e remodelação tecidual. Essas propriedades fazem de DCBLD1 um alvo útil para estudos mecanísticos que conectam a sinalização de receptores de superfície à ativação de vias downstream e a transições de estado celular.

DCBLD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCBLD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DCBLD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCBLD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCBLD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DCBLD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCBLD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DCBLD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DCBLD1 em células tumorais com expressão de DCBLD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.