DBT CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-410755

개요

디하이드로리포아마이드 분지사슬 트랜스아실레이스 E2(DBT)는 미토콘드리아 분지사슬 α-케토산 탈수소효소(BCKDH) 복합체의 E2 코어 구성요소로, 분지사슬 아미노산 이화작용에 필수적인 아실 전달(acyl-transfer) 단계를 촉매합니다. DBT는 류신, 아이소류신, 발린 유래 케토산의 효율적 산화를 가능하게 함으로써 아미노산 이용을 에너지 생산과 연결하고, 미토콘드리아 탄소 플럭스와 산화환원 균형 유지에 기여합니다. 또한 DBT의 활성은 BCKDH 조절 인산화와 연동되어 있으며, 대사 스트레스 반응, 미토콘드리아 기능, 영양 감지(nutrient-sensing) 경로에 영향을 미칩니다. DBT 및 관련 BCKDH 구성요소의 기능 장애 또는 조절 이상은 분지사슬 아미노산 항상성에 영향을 주는 선천성 대사 이상과 연관되어 있으며, 대사 재배선 및 미토콘드리아 기능장애의 맥락에서 자주 연구됩니다.

DBT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 DBT 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 DBT 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 DBT의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 DBT 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 DBT 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 DBT 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• DBT 기능에 중요한 DBT 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 DBT 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• DBT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 DBT CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 DBT 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  DBT HDR 플라스미드 (h) 및 DBT HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 DBT 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 DBT 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.